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產品名稱☁☁│:
胚肺二倍體細胞;2BS
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胚肺二倍體細胞;2BS相關產品☁☁│:小鼠核因子E2相關因子2ELISA檢測試劑盒說明
大鼠細胞間粘附分子2ELISA檢測試劑盒圖片
大鼠褪黑素受體ELISA檢測試劑盒說明
  胚肺二倍體細胞;2BS的詳細資料☁☁│:

公司細胞廣泛用於國內院校的細胞生物學研究│▩,作為實驗專案研究↟☁▩。下列產品詳細介紹☁☁│:

產品名稱

生長特性

貨號

胚肺二倍體細胞;2BS

貼壁生長

EY-X63450

細胞名稱  胚肺二倍體細胞;2BS
形態特性: 成纖維細胞樣

生長特性: 貼壁生長

特徵特性: 人胚肺二倍體細胞,來自於女孩胚胎,1976年由北京生物製品研究所建株↟☁▩。

培養條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清│▩,10%;水解乳蛋白│▩,10%

傳代方法: 1☁☁│:2-1☁☁│:4

傳代情況: P21

凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 培養法(-)

冷凍儲存細胞之方法
冷凍儲存方法一: 冷凍管置於4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存↟☁▩。
冷凍儲存方法二: 冷凍管置於已設定程式之可程式降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下│▩, 再放入液氮槽vapor phase儲存↟☁▩。*-20 ℃不可超過1 小時│▩, 以防止冰晶過大│▩,造成細胞大量死亡│▩,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中│▩,惟存活率稍微降低一些↟☁▩。
實驗要點及說明☁☁│:
1.本方法適用於貼壁細胞培養│▩,而不適用於懸浮細胞培養│▩,懸浮細胞可使用滴片法; 
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃製造│▩,並經過鉻酸洗液處理; 
3.蓋玻片非常薄│▩,易碎│▩,取放蓋玻片時動作要輕; 
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞│▩,可以使用較大的培養皿│▩,但不宜過大│▩,以避免培養液的浪費和增加汙染機率; 
5.如果細胞貼壁生長能力較差│▩,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘並自然晾乾↟☁▩。
實驗報告☁☁│:
一│╃╃·、分離與培養☁☁│:
1│╃╃·、無菌條件下│▩,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織│▩,然後用PBS將此組織塊清洗2次│▩,將成1mm3左右大小;
2│╃╃·、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶)│▩,混懸10s│▩,置37℃條件下消化10min│▩,之後用滴管吹打製成單細胞懸液│▩,自然沉澱並收集上清│▩,用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置;
3│╃╃·、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液│▩,混懸10s│▩,置37℃消化10 min後│▩,按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置│▩,重複此步驟2-3次│▩,直至組織完全被消化;
4│╃╃·、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液│▩,1200r/min 離心10min│▩,棄去上清│▩,沉澱細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸│▩,接種於25cm2培養瓶│▩,放置於37℃ │▩,5%CO2 培養箱中培養;
5│╃╃·、差速貼壁1h後│▩,吸出培養基│▩,按實驗需要接種於6孔板中繼續培養;
二│╃╃·、免疫熒光鑑定☁☁│:
1│╃╃·、待心房肌細胞生長至80%融合時│▩,棄去培養基│▩,用溫育的PBS沖洗細胞2次│▩,每次10min│▩,然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2│╃╃·、PBS沖洗細胞2次│▩,每次10min│▩,然後在4℃條件下│▩,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3│╃╃·、PBS沖洗細胞2次│▩,每次10min│▩,然後在室溫條件下│▩,用4% BSA封閉細胞30min;
4│╃╃·、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗│▩,然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5│╃╃·、PBS沖洗細胞3次│▩,每次10min│▩,按1☁☁│:150的比例稀釋抗α-actin的二抗│▩, 37℃條件下放置1h;
6│╃╃·、用PBS沖洗3次│▩,每次10min│▩,在倒置熒光顯微鏡下觀察影象並拍照↟☁▩。
rrGDNF (50 UG)細胞名稱: 抗丙型肝炎病膜區抗原單克隆抗體雜交瘤細胞株;HCVEA-246 RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清│▩,10%

rrGDNF (10 UG)細胞名稱: 抗呼吸道合胞病單克隆抗體雜交瘤細胞株;RSV-4C1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清│▩,10%

rrFractalkine (Chem Dom) (25 UG)細胞名稱: 抗戍型肝炎病單克隆抗體雜交瘤細胞株;HEV-4 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清│▩,10%

rrFGF-BP, CF (25 UG)細胞名稱: 小鼠胚胎細胞;SC-1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清│▩,10%

rrFGF-BP (25 UG)細胞名稱: 小鼠結締組織L細胞株929克隆;L-929[L929] MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)馬血清│▩,10%

rrFGF basic, CF (25 UG)細胞名稱: 非洲綠猴腎細胞;CV-1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清│▩,10%

rrFGF basic (25 UG)細胞名稱: 非小細胞肺癌細胞;H125 RPMI1640(w/oHepes)優質胎牛血清│▩,10%

rrFasL/TNFSF6, CF (25 UG)細胞名稱: 臍靜脈內皮細胞;HUV-EC Medium200+LSGS

rrFasL/TNFSF6 (25 UG)細胞名稱: 慢性髓系白血病細胞;K562 RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清│▩,10%

rrFas/TNFRSF6/Fc, CF (50 UG)細胞名稱: IL-2依賴的淋巴T細胞系;Kit225-k6 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清10%

rrE-Selectin (CD62E)/Fc, CF (100 UG)細胞名稱: 導管瘤細胞;BT-474 RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清│▩,10%;10ug/ml人重組insulin

rrEpo, CF (10 UG)細胞名稱: urkitt淋巴瘤細胞;Raji RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清│▩,10%

rrEpo (10 UG)細胞名稱: 急性髓性白血病細胞;KG-1a IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium新生牛血清│▩,20%

rrEphB1/Fc, CF (200 UG)細胞名稱: 直腸癌細胞;DiFi DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

rrEphA5/Fc, CF (200 UG)細胞名稱: 小鼠纖維肉瘤細胞;WEHI-13VAR RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清│▩,10%

rRELMg MAb (Cl 395310) (100 UG)細胞名稱T淋巴細胞白血病細胞;C8166 RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清│▩,10%
胚肺二倍體細胞;2BS人抗鼠抗體(HAMA)ELISA試劑盒LEPELISAkit產品規格:48T/96T↟☁▩。

人可溶性腺苷環化酶(sAC)ELISA試劑盒LEPELISAKit產品規格:48T/96T↟☁▩。

人腺苷環化酶1(AC-1)ELISA試劑盒LEPELISAKit產品規格:48T/96T↟☁▩。

人促有絲分裂因子(MF/MPF)ELISA試劑盒LEPELISAKit產品規格:48T/96T↟☁▩。

人特異性巨噬細胞武裝因子(SMAF)ELISA試劑盒LEPELISAkit產品規格:48T/96T↟☁▩。

人晚期糖基化終末產物受體(RAGE/AGER)ELISA試劑盒LF/LTFAb-IgGELISAkit產品規格:48T/96T↟☁▩。

人芳香烴受體(AhR)ELISA試劑盒LFA-1ELISAKit產品規格:48T/96T↟☁▩。

5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA試劑盒LFA-2ELISAKit產品規格:48T/96T↟☁▩。
操作步驟:
1│╃╃·、貼壁細胞的消化
①吸除培養液│▩,用無菌 PBS│╃╃·、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次│▩,以去除殘餘的血清↟☁▩。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution│▩,略蓋過細胞即可│▩,室溫放置 0.5~2min│▩, 不同的細胞消化時間有所不同↟☁▩。
③顯微鏡下觀察│▩,細胞明顯收縮│▩,並且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來│▩,吸除細胞消化液↟☁▩。加入含血清的  完全細胞培養液│▩,吹打下細胞│▩,即可直接用於後續實驗↟☁▩。
④如果發現消化不足│▩,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化↟☁▩。
⑤如果發現細胞消化時間過長│▩,未及吹打細胞│▩,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落│▩, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來↟☁▩。1000~2000g 離心 1min│▩,沉澱細胞│▩,儘量去除細胞消化液後│▩,加入含血清的完全培養液重新懸浮細胞│▩,即可用於後續實驗↟☁▩。
2│╃╃·、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大│▩,通常以消化後可以充分打散組織為宜↟☁▩。

 

產品相關關鍵字☁☁│: 胚肺二倍體細胞 2BS
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